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細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測試劑盒
更新時(shí)間：2024-06-26
訪問量：1429
廠商性質(zhì)：代理商
生產(chǎn)地址：美國
細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測試劑盒
一、包裝規(guī)格
產(chǎn)品編號：ZT10000
規(guī)格：50T
儲存條件
-20oC避光保存，二年有效；
二、產(chǎn)品說明：
細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是一種采用經(jīng)典的碘化丙啶染色方法進(jìn)行細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡分析。
碘化丙啶(Propidium Iodide，簡稱PI)是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強(qiáng)度和雙鏈DNA的含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞進(jìn)行DNA含量測定，然后根據(jù)DNA含量的分布情況，可以進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡分析。
碘化丙啶染色后，假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為2，正在進(jìn)行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1-2之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化(DNA fragmentation)導(dǎo)致部分基因組DNA片段在染色過程中丟失，因此凋亡細(xì)胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強(qiáng)度小于1，在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰，即凋亡細(xì)胞峰。
細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂，產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細(xì)胞凋亡的早期，細(xì)胞對前向角光散射的能力顯著降低，對側(cè)向光散射的能力增加或沒有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期，前向和側(cè)向光散射的信號均降低。因此可通過流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞光散射的變化觀察細(xì)胞凋亡情況。
本試劑盒通常應(yīng)用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測。如果用于組織的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測，則必須把組織消化成單細(xì)胞狀態(tài)，才可以進(jìn)行檢測。
本試劑盒足夠檢測50個(gè)樣品，每個(gè)樣品的細(xì)胞數(shù)量可以為10-100萬。
三、試劑盒組份：
產(chǎn)品組分編號 | 產(chǎn)品組份名稱 | 包裝 | 保存 |
ZT10000-1 | 染色緩沖液 | 25ml | -20°C避光2年 |
ZT10000-2 | 碘化丙啶染色液(20X) | 1.25ml | -20°C避光2年 |
ZT10000-3 | RNase A(50X) | 0.5ml | -20°C避光2年 |
四、注意事項(xiàng)：
1）本試劑盒需要使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。需自備PBS和70%乙醇。
2）細(xì)胞處理需輕柔，盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
3）為防止不同批次細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)時(shí)所處周期不同導(dǎo)致重復(fù)性差，可以在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行細(xì)胞的同步化處理。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞應(yīng)處于對數(shù)生長期，貼壁細(xì)胞一般在50～80%匯合度時(shí)收集為宜。
4）400目篩網(wǎng)過濾是用來將粘在一起的細(xì)胞團(tuán)濾掉，留下單細(xì)胞，否則會出現(xiàn)人為的多倍體干擾。如果沒有條件過濾，請?jiān)谌旧皩⒓?xì)胞輕彈以分散，再進(jìn)行染色。
5）熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
6）碘化丙啶對人體有刺激性，操作碘化丙啶時(shí)，應(yīng)注意防護(hù)，保護(hù)眼睛、避免吸入。
7）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
1.使用方法：
細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：細(xì)胞數(shù)量控制在1×105~1 × 106個(gè)。
a）貼壁細(xì)胞：小心吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，用胰酶消化細(xì)胞，制備成單細(xì)胞懸液。1000 g離心5 min，沉淀細(xì)胞，棄上清，用1 mL預(yù)冷的PBS潤洗細(xì)胞一次，離心收集細(xì)胞。
b）懸浮細(xì)胞：1000 g離心5 min，沉淀細(xì)胞，小心吸除上清。加入1 mL預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心收集細(xì)胞。
c）組織細(xì)胞：將組織塊用剪刀剪成盡量小的小塊后，用0.25%的胰酶消化0.5-1 h，經(jīng)過200-400目篩網(wǎng)過濾得到單細(xì)胞懸液。1000 g離心5 min，沉淀細(xì)胞。加入約1 mL預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。如組織難以消化，可加入適量膠原酶。
2. 細(xì)胞固定：
細(xì)胞沉淀用1 mL預(yù)冷的70%乙醇輕輕混勻，4℃固定2 h以上或者過夜。然后1000 g左右離心5 min沉淀細(xì)胞后，小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的70%乙醇，以避免吸走細(xì)胞。
加入1 mL預(yù)冷的PBS重懸。然后再次1000g離心5 min沉淀細(xì)胞。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞。輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。
3. 碘化丙啶染色液的配制：
對于1個(gè)樣品，在0.5 mL染色緩沖液中加入25uL 碘化丙啶儲液和10uL RNase A溶液，混勻待用。其它數(shù)量的樣品參考下表，根據(jù)待檢測樣品的數(shù)量配制適量的碘化丙啶染色液：
1個(gè)樣品 | 6個(gè)樣品 | 12個(gè)樣品 | |
染色緩沖液 | 0.5mL | 3mL | 6mL |
碘化丙啶染色液(20X) | 25uL | 150uL | 300uL |
RNase A(50X) | 10uL | 60uL | 120uL |
Final volume | 0.535mL | 3.21mL | 6.42mL |
注：配制好的碘化丙啶染色液短時(shí)間內(nèi)可以4℃保存，宜當(dāng)日使用。
4. 染色：
每管細(xì)胞樣品中加入0.5毫升碘化丙啶染色液，輕輕混勻重懸細(xì)胞沉淀，37℃避光孵育30分鐘，就可以進(jìn)行流式檢測，流式檢測最好在5h內(nèi)完成。
5. 流式檢測和分析：
用流式細(xì)胞儀在激發(fā)波長488nm波長處檢測紅色熒光，同時(shí)檢測光散射情況。采用適當(dāng)分析軟件進(jìn)行細(xì)胞DNA含量分析和光散射分析。
僅供科學(xué)研究使用，禁止用于它用。
