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共轉(zhuǎn)化,篩選轉(zhuǎn)染細(xì)胞的實(shí)用工具
發(fā)布時(shí)間: 2021-10-11 點(diǎn)擊次數(shù): 1304次想要達(dá)到轉(zhuǎn)染的目的,即分析轉(zhuǎn)染基因的功能和表達(dá),需要轉(zhuǎn)染的基因穩(wěn)定整合進(jìn)入宿主染色體。
根據(jù)細(xì)胞類型,細(xì)胞群體中,最高有80%的細(xì)胞,以瞬時(shí)表達(dá)的方式表達(dá)轉(zhuǎn)染的基因。但對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,好的情況,也只有1/1000的成功率——細(xì)胞能穩(wěn)定表達(dá)轉(zhuǎn)染的基因。
所以,我們需要通過(guò)篩選活的新表型(標(biāo)記)的細(xì)胞,來(lái)分離穩(wěn)定轉(zhuǎn)染體。方法是將標(biāo)記的基因和待轉(zhuǎn)染的基因進(jìn)行重組、連接,共同轉(zhuǎn)染到細(xì)胞核內(nèi)。這種物理上沒(méi)有關(guān)聯(lián)的基因整合成1個(gè)序列,并在同一轉(zhuǎn)化細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的這種現(xiàn)象,叫做共轉(zhuǎn)化。
那么,篩選具體是如何進(jìn)行的呢?
一般情況下,這個(gè)標(biāo)記是某種編碼抗生素抗性的基因,和待轉(zhuǎn)染基因一起在細(xì)胞上表達(dá),如第一個(gè)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞上廣泛使用的篩選基因,編碼胸苷激酶(TK)的病毒基因。
待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系,是不含TK的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系,在轉(zhuǎn)染成功后,才會(huì)變成含TK的細(xì)胞系,才能在氨基嘌呤存在的培養(yǎng)基中生存。
因此,共轉(zhuǎn)化是一個(gè)篩選細(xì)胞的實(shí)用方法。
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